Nukleiinihappojen kvantisointi spektrofotometrissä
Nukleiinihappojen kvantifiointi on spektrofotometrin useimmin käytetty funktio . Oligonukleotideja, yksijuosteinen, kaksijuosteinen DNA ja RNA voidaan kvantisoida puskureissa. Nukleiinihapon enimmän absorptiopiikin absorptiopiikki on 260 nm. Jokaisella nukleiinihapolla on erilainen molekyylikoostumus, ja siksi sillä on erilaiset muuntokertoimet. Eri tyyppisten nukleiinihappojen kvantifioimiseksi valitse vastaavat kertoimet etukäteen. Esimerkiksi 1OD: n absorbanssi vastaa 50 ug / ml dsDNA: ta, 37 pg / ml ssDNA: ta, 40 pg / ml RNA: ta ja 30 pg / ml Olig. Testin jälkeen absorbanssiarvo muunnetaan edellä kertoimella vastaavan näytekonsentraation saamiseksi. Ennen testausta, valitse oikea prosessi, kirjoita kantaliuoksen ja laimennoksen volyymit ja testaa aihiot ja näyteliuokset. Kokeilu ei kuitenkaan ollut helppoa. Epävakaat lukemat voivat olla kokeilijoiden suurin päänsärky. Mitä korkeampi instrumentin herkkyys, sitä suurempi näytteistetty absorbanssi ajautuu.
Itse asiassa spektrofotometrin suunnitteluperiaatteen ja toimintaperiaatteen mukaan absorbanssin arvo voi muuttua tietyllä alueella, toisin sanoen instrumentilla on tietty tarkkuus ja tarkkuus. Kuten Eppendorf Biophotometrin tarkkuus ≤ 1,0% (1A). Näiden moninkertaisten testien tulokset vaihtelevat keskimäärin 1,0% ja ovat kaikki normaaleja. Lisäksi on otettava huomioon myös nukleiinihapon fysikaalis-kemialliset ominaisuudet, puskurin pH-arvo nukleiinihapon, ionikonsentraation jne. Liuottamiseksi jne. Testin aikana liian suuri ionin pitoisuus aiheuttaa myös lukemisen drift kuin TE, joka suuresti vakauttaa lukemista. Näytteen laimennettu pitoisuus on myös ei-vähäpätöinen tekijä: johtuen pienistä hiukkasista väistämättömässä esiintymisessä näytteessä, erityisesti nukleiinihappotäytteissä. Näiden pienien hiukkasten läsnäolo häiritsee testivaikutusta. Hiukkasten vaikutuksen minimoimiseksi testituloksiin nukleiinihapon absorbanssin on oltava vähintään 0,1 A ja absorbanssi on edullisesti 0,1-1,5 A. Tässä kohdassa ei saa olla kuplia seoksessa, eikä aihiossa ole suspensiota. Muuten lukemat ajelehtivat voimakkaasti; samaa kolorimetristä kuppia on käytettävä aihion ja näytteen testaamiseen; muuten keskittymisero on liian suuri; muunnoskerroin ja näytekonsentraatioyksikkö ovat samat; Ikkunan kulunut kyvetti; näytteen tilavuuden on oltava yli vaaditun värikupin vähimmäistilavuus jne.
Nukleiinihappokonsentraation lisäksi spektrofotometrillä on useita erittäin tärkeitä suhteita samanaikaisesti näytteen puhtauden ilmaisemiseksi, kuten A260 / A280-suhteen näytteen puhtauden arvioimiseksi, koska proteiinin absorptiopiikki on 280 nm. Puhtaiden näytteiden suhde on suurempi kuin 1,8 (DNA) tai 2,0 (RNA). Jos suhde on alle 1,8 tai 2,0, se osoittaa proteiinin tai fenolisten aineiden esiintymistä. A230 osoittaa, että näytteessä on joitain epäpuhtauksia, kuten hiilihydraatteja, peptidejä, fenoleja jne. Puhtaan nukleiinihapon A260 / A230 suhde on suurempi kuin 2,0. A320 havaitsee liuoksen sameuden ja muut häiriötekijät. Pure näyte, A320 on yleensä 0.
Yritys on erikoistunut spektrofotometrien myyntiin, tervetulleita asiakkaita, jotka tarvitsevat konsultointia ja ostoa, tarjoamme sinulle vilpitöntä palvelua ja laatutuotteita sekä alhaisempia hintoja.
Sähköposti: info@sumerlab.com
Web: sumerinstrument.com